Otros (detección de PHB, actividad agarasa, etc...)
La acumulación de gránulos de poli-hidroxibutirato (PHB), o las actividades enzimáticas, son otras características que forman parte de la descripción de muchos taxones bacterianos.
Material necesario
Cultivo activo de las cepas (placa Petri o tubo de agar inclinado).
Se recomienda la inclusión de al menos cuatro cepas en el estudio.
Metodología
La detección de gránulos de poli-hidroxibutirato (PHB) se realiza mediante observación en fresco al microscopio óptico de cultivos crecidos en un medio basal adicionado con el 0,2% (p/v) de la fuente de carbono y energía que permite el mayor crecimiento de la cepa. La presencia de los gránulos de PHB se analiza tiñendo con el colorante Nile Blue A (Smibert and Krieg, 2007). La prueba se considera positiva cuando mediante microscopía de fluorescencia se observan gránulos refringentes en las células de la preparación.
La presencia de actividades enzimáticas extracelulares como agarasa, quitinasa, alginasa, lipasa, Dnasa, esterasa, etc, se detecta en el laboratorio evaluando la capacidad del cultivo bacteriano para degradar compuestos en placa. Para ello se hace crecer al microorganismo en un medio general, provisto de los nutrientes básicos necesarios para un buen crecimiento de la cepa, y adicionado de la macromolécula cuya hidrólisis se quiere investigar (proteínas, polisacáridos, lípidos, ácidos nucleicos). Tras la incubación, se investiga la presencia de la macromolécula utilizando un reactivo apropiado para poner de manifiesto su presencia. A veces la presencia de la macromolécula otorga al medio un aspecto característico (opacidad, solidez) cuya desaparición indica a simple vista que se ha producido la hidrólisis de la misma.
En todos los casos, el resultado se ofrece como imagen en formato jpg.
Bibliografía
Smibert RM, Krieg NR. Phenotypic characterization. 2007. In: Manual of Methods for General Bacteriology, pp. 607-654. Edited by: Reddy CA, Beveridge TJ, Breznak JA, Marzluf G, Schmidt TM, Snyder LR. Washington DC: American Society for Microbiology.
