Caracterización microbiana mediante diversas aproximaciones.

La caracterización de una cepa microbiana puede abordarse de distintas maneras, según el microorganismo a estudiar o el tipo de estudio que se quiere realizar. A continuación, se enumeran las distintas técnicas de caracterización disponibles en nuestro catálogo:

Caracterización morfológica de procariotas

Comprende el estudio de la morfología colonial de la cepa (homogeneidad, tamaño, forma, color, opacidad y textura de las colonias) y su observación al microscopio (forma y tamaño celular, movilidad, etc.). En la CECT se incluye además la determinación de Gram, la catalasa y la oxidasa para células procariotas.

La morfología celular se estudia mediante observación de una preparación en fresco al microscopio óptico a partir de un cultivo joven cultivado en placa o en caldo. Esta observación permite determinar no solo la forma, sino el tamaño de las células.

La morfología colonial se analiza mediante observación de la siembra por triple estría en el medio de cultivo recomendado para la cepa.

El valor de Gram de las células se obtiene empleando la técnica del KOH 3% (Buck, 1982).

El valor de la catalasa se obtiene mediante la técnica del peróxido de hidrógeno 10 vol. (Cowan y Steel, 1982).

Para determinar la presencia del citocromo C se utiliza la prueba de la oxidasa (Smibert y Krieg, 1994).

Estudio morfológico y fisiológico (hongos filamentosos)

Incluye el estudio de las características macroscópicas y microscópicas de la cepa, después del crecimiento en diferentes medios de cultivo, a diferentes temperaturas y tras un periodo de incubación de 7 días. Las características estudiadas son:

• a nivel macroscópico: diámetro de las colonias, textura, color, producción de pigmento difusible al medio y producción de exudado.
• a nivel microscópicas: tamaño y forma de los conidios, conidióforos u otras estructuras presentes en la cepa.

Caracterización fenotípica mediante tiras API

Existen distintas galerías según el microorganismo a estudiar:

• API 20E, para la identificación de microorganismos pertenecientes al grupo de las enterobacterias y de otros bacilos Gram negativos.
• API 20NE, para la identificación de bacilos Gram negativos no pertenecientes al grupo de las enterobacterias como Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas y otros.
• API 20Aª, para la identificación de bacterias anaerobias.
• API 50CH, para el estudio metabólico de carbohidratos y la identificación de Bacillus (CHB), Lactobacillus (CHL) y Enterobacteriaceae (CHE).
• API Candida, para levaduras de interés clínico.

El ensayo se realiza siguiendo las recomendaciones del fabricante.

El informe enviado contiene el perfil bioquímico obtenido y el resultado que se genera al contrastar dicho perfil con los existentes en la base de datos de Biomérieux.

Nota: como en cualquier otro sistema de identificación algunos aislados dan lugar a resultados no concluyentes, que aparecerán comentados en el informe según se trate de baja discriminación, identificación no fiable, perfil dudoso o perfil inaceptable.

Tinción de flagelos bacterianos

La presencia de flagelos en bacterias móviles se analiza tiñendo suspensiones celulares con el colorante de Ryu (Heimbrook et al. 1989).

Perfiles genéticos

• Técnica RAPD (randomly amplified polymorphic DNA)
  El personal de la CECT tiene experiencia acumulada en la utilización de RAPDs para diferentes grupos microbianos.
• Técnica SSR (simple sequence repeat)
  Con la técnica SSR se obtienen perfiles genéticos generados por amplificación mediante PCR de las regiones microsatélites. Las secuencias microsatélites son muy abundantes en los genomas de eucariotas y algunos procariotas. Son unidades cortas, de 1 a 6 pares de bases (motivos básicos), que se repiten en tándem un elevado número de veces. Su frecuencia y tipo de repetición varía en los genomas de distintas especies.

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