Charla, día 4 de octubre, 12 h, Salón de Grados de Química.
"Immunoassaig de flux lateral millorat per electroforesi per a l'anàlisi altament sensible d'antígens virals"
Inmunoensayo de flujo lateral mejorado por electroforesis para el análisis altamente sensible de antígenos virales
Sergey N Krylov
Department of Chemistry and Centre for Research on Biomolecular Interactions, York University, Toronto, Ontario, Canada
Los métodos de detección en el punto de atención son necesarios para llevar a cabo pruebas médicas eficaces, control de calidad de los alimentos, monitorización medioambiental, etc. En este tipo de métodos, se incluye el inmunoensayo de flujo lateral (LFIA), el cual es excepcionalmente simple, ya que no requiere instrumentación analítica y puede ser utilizado rápidamente por personas no capacitadas en entornos con recursos limitados. LFIA utiliza tiras reactivas: membranas superpuestas preensambladas cargadas con inmunorreactivos. Para ello, se coloca una gota de la muestra líquida en la tira, moviéndose por capilaridad lateralmente a través de las membranas. El movimiento de la muestra a través de las zonas de inmunorreactivos provoca la rehidratación de estos últimos y facilita la unión por afinidad de los anticuerpos marcados al analito. Esta unión conduce a la formación de una zona con inmunocomplejos marcados en la tira. Normalmente se utilizan nanopartículas de diferente naturaleza como marcadores para facilitar la detección visual (colorimétrica) de los inmunocomplejos. Se obtiene un resultado cualitativo en 15 min mediante examen visual de la tira reactiva para detectar la presencia y/o ausencia de dos (o más) zonas coloreadas. La rapidez, la simplicidad y el bajo costo de la LFIA la han convertido en una técnica de elección indiscutible para el cribado masivo de la población durante las pandemias. También es un método habitual de elección en ensayos tales como las pruebas de embarazo. La desventaja es que el límite de detección (LOD) de LFIA es demasiado alto para que sea aplicable a muestras con bajas concentraciones de analito, lo que hace que sea imposible usar LFIA para la detección de patógenos y biomarcadores de enfermedades presentes en concentraciones bajas. Así pues, reducir los LODs de LFIA es una tarea esencial que ha atraído una creciente atención de la comunidad investigadora. A menudo, la mejora de los LODs se logra comprometiendo uno o más de los aspectos ventajosos de LFIA.
Para superar las limitaciones de LFIA, en esta charla se presenta un procedimiento de mejora de la señal que se realiza después de completar LFIA e implica el movimiento controlado de nanopartículas de oro funcionalizadas con biotina y estreptavidina a lo largo de la tira de prueba mediante electroforesis. Las nanopartículas se unen a inmunocomplejos y entre sí formando agregados multicapa en la tira reactiva, mejorando así la señal. En concreto, se ha obtenido una reducción del LOD del antígeno de la hepatitis B de aproximadamente 8 a 0,12 ng/mL, lo que lo hace clínicamente aceptable. El ensayo en muestras clínicas de suero y plasma para la hepatitis B reveló que la mejora de la señal aumentó la sensibilidad diagnóstica de LFIA del 72 al 98%, sin afectar su especificidad del 90%. La mejora de detección de LFIA impulsada por electroforesis es universal (independiente de antígeno), lleva un tiempo reducido (dos minutos) y puede ser realizada por una persona no capacitada utilizando un accesorio económico.
