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La microscopía confocal se encuentra englobada dentro de la microscopía óptica, concretamente de la microscopía de fluorescencia. El desarrollo de nuevas sondas fluorescentes y el aumento de resolución que proporciona la utilización de la microscopía confocal, han hecho posible que la fluorescencia sea una de las técnicas más utilizadas en la actualidad. La microscopía confocal se caracteriza por:

  • La utilización de una fuente de iluminación temporal focalizada en un solo punto de la muestra, un láser, por esta razón la imagen final de la muestra se obtiene tras sucesivos barridos de la misma.
  • La accesibilidad de la radiación emitida al fotodetector está limitada por un diafragma (pinhole), el cual permite la exclusión de la radiación emitida por los puntos de la muestra que no se encuentran en el plano focal. Además, la utilización de un software adecuado permite mejorar la calidad de la imagen por disminución de la sensibilidad de los fotodetectores a intensidades bajas de fluorescencia, con lo que se reduce el ruido de fondo.

La combinación de la captación de imágenes en el plano focal con el software permite la utilización del microscopio confocal como un “microtomo óptico”, lo cual posibilita la obtención de secciones ópticas de la muestra, base para la obtención de imágenes en tres dimensiones.

 
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