La técnica MALDI-TOF MS (matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry) permite la obtención del perfil proteico característico de una cepa microbiana a partir del análisis de sus proteínas ribosomales, principalmente.

El perfil proteico obtenido permite la identificación del microorganismo por comparación con los perfiles incluidos en la base de datos de referencia y la caracterización de cualquier cepa microbiana.

La CECT oferta la identificación y/o la caracterización de cepas por MALDI-TOF MS (consultar, aruvira@cect.org)

Material necesario

Cultivo activo de la cepa (placa Petri sembrada por triple estría).

Para cepas difíciles de cultivar o con requerimientos específicos, 20 mg de biomasa resuspendida en 1200 µl de una solución 1:3 agua/etanol en un microtubo de la marca Eppendorff (consultar).

Metodología

El análisis de proteínas se lleva a cabo siguiendo el protocolo recomendado por Bruker Daltonics (http://www.bdal.de) mediante la extracción etanol/ácido fórmico. La adquisición de espectros se realiza mediante un espectrómetro de masas Microflex L20 (Bruker Daltonics) equipado con un láser N2, en modo ion lineal positivo, con un voltaje de aceleración de 20 kV. Los espectros son adquiridos como la suma de 240 disparos por diana. El rango de masa utilizado para el análisis es de 2.000-20.000 Da. El programa utilizado para el procesamiento de datos es el BioTyper 3.1 (Bruker Daltonics) tal y como se describe en Maier et al. (2006).

Bibliografía

Maier et al., (2006). T. Maier, S. Klepel, U. Renner and M. Kostrzewa, Fast and reliable MALDI-TOF MS-based microorganism identification, Nat Methods 22 (2006).