La composición de ácidos grasos de las cepas se obtiene de forma automatizada mediante el análisis de ácidos grasos ésteres metilados (fatty acid methyl ester, FAME) por cromatografía de gases.

El sistema MIDI (Sherlock Microbial Identification System), permite la identificación de cepas de especies registradas en las librerías MIDI y la caracterización de aislados bacterianos.

Debido a que el perfil de ácidos grasos depende en gran medida de las condiciones de cultivo utilizadas, es fundamental enviar las cepa en cultivo activo y especificar las condiciones de crecimiento a emplear para la determinación de ácidos grasos. Para cepas difíciles de cultivar o con requerimientos específicos se puede enviar la masa celular congelada y recogida siguiendo las especificaciones pertinentes.

Material necesario

Cultivo activo de la cepa (placa Petri o tubo de agar inclinado).

Para cepas difíciles de cultivar o con requerimientos específicos, 40 mg de biomasa bacteriana congelada.

Metodología

Para la extracción de los ácidos grasos celulares se sigue el protocolo recomendado por MIDI Microbial Identification System (Sasser, 1990). La separación del contenido celular de ácidos grasos se lleva a cabo en un cromatógrafo de gases Agilent 6850, y el análisis posterior se realiza con el Sistema de Identificación Microbiana MIDI, usando los métodos TSBA6 o CLIN6 (MIDI, 2008).

Bibliografía

MIDI (2008). Sherlock Microbial Identification System Operating Manual, version 6.1. Newark, DE: MIDI Inc.

Sasser, M. (1990). Identification of bacteria by gas chromatography of cellular fatty acids, MIDI Technical Note 101. Newark: DE: MIDI Inc