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El contenido en G+C mol% del DNA es la proporción de citosinas y guaninas respecto al total de nucleótidos en el genoma, y es un carácter ampliamente utilizado en las descripciones taxonómicas de microorganismos procariotas.

Tradicionalmente, este valor se obtenía mediante técnicas laboriosas como la desnaturalización térmica del DNA genómico y la separación del DNA por la densidad de flotación en CsCl. Más recientemente se han venido utilizado técnicas como la separación por HPLC o el cálculo mediante PCR a tiempo real según el protocolo de Gonzalez y Saiz-Jimenez (2002).

La cada vez más fácil disponibilidad de secuencias genómicas permite la estimación del valor del contenido en G+C mol% a partir de estas secuencias utilizando programas informáticos de acceso libre como GGDH, obteniéndose valores más precisos que los adquiridos en el laboratorio.

Material necesario

Cultivo activo, DNA genómico de la cepa a caracterizar o secuencia genómica del microorganismo.

Se necesitan más de 2 microgramos de DNA genómico a una concentración de 40 ng/µl suspendido en agua ultrapura o tampón TE, con valores de A260/A280 de entre 1,8 y 2. El DNA se ha de enviar en frío.

Metodología

A partir del cultivo activo o del DNA genómico se calcula el valor del contenido G+C mol% mediante la técnica de PCR a tiempo real. En la CECT se realiza la desnaturalización del DNA en un termociclador StepOnePlus™ Real-Time PCR System de Applied Biosystems, con el programa StepOne™ software.

Bibliografía

Gonzalez, J.M. and Saiz-Jimenez, C. (2002). A fluorimetric method for the estimation of G+C mol% content in microorganisms by thermal denaturation temperature. Environ Microbiol 4, 770–773

 
 
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